<<
>>

Исследование раздражающего действия in vivo на кожу и слизистые оболочки лабораторных животных

Для установления характера и выраженности раздражающего действия наноразмерных частиц серебра, цинка и титана диоксида на кожные покровы

и слизистые проводились токсикологические исследования на экспериментальных животных в соответствии с МУ 1.2.2635-10, поскольку именно данная методика позволяет с помощью накожных аппликаций и конъюнктивальной пробы оценить интенсивность местных воспалительных реакций.

Эксперимент проводился в соответствии с «Правилами лабораторной практики» (Приказ Минздравсоцразвития РФ от 23 августа 2010 г. №708н).

Так как наиболее чувствительным при кожном нанесении в видовом отношении животным является морская свинка при исследовании раздражающего действия вещества на кожу использовали молодых морских свинок светлой масти обоих полов (масса тела 250—300 г) с чистой здоровой кожей без механических повреждений (80 животных). Все животные содержались при 12-ти часовом цикле освещения, температурном режиме 20- 26 ºC, влажности воздуха 50-65 %, 8-10-ти кратной смене объема воздуха комнаты в час, получали полусинтетический рацион в соответствии с суточными нормами кормления (Приказ министра здравоохранения от 10 марта 1966 г. № 163). Животных акклиматизировали в условиях лаборатории в течение 7 дней до начала эксперимента.

Для исследования кожно-раздражающего действия за 1-2 дня до эксперимента тщательно выстригали шерсть на участке аппликации по обе стороны от позвоночника. Правый бок служил для аппликации изучаемого вещества, левый для контроля (Рис. 7).

Образцы исследовали, нанося открытым способом непосредственно на кожные покровы при температуре окружающей среды 23°С. Продолжительность контакта 2 часа. После окончания экспозиции остатки продукта удаляли теплой водой с мылом. Время наблюдения – 14 дней.

Рисунок 7.

Схема расположение областей для аппликации при исследовании раздражающего действия на кожу экспериментальных

животных

В исследовании использовали растворы наноразмерных частиц серебра в концентрациях: нативный раствор, 50 г/л, 10 г/л, 2 г/л; наноразмерных частиц цинка в концентрациях: нативный раствор, 50 г/л, 10 г/л и наноразмерных частиц титана в концентрациях 500 г/л и 250 г/л.

Оценивали реакцию кожи каждый раз после удаления исследуемого материала и через 14 дней после первого воздействия по таким показателям функционального состояния кожи экспериментальных животных, как интенсивность эритемы и выраженность отёка (табл.6). Сравнивали состояние кожи животных опытной и контрольной групп. Баллы каждого наблюдения делили на общее число наблюдений, чтобы получить среднее значение в опытной и контрольной группах.

Оценка функционального состояния кожи экспериментальных животных

Таблица 6

а) Оценка степени эритемы по С.В. Суворову и В.В. Чернышевой

Интенсивность эритемы Оценка в

баллах

Отсутствие эритемы 0
Слабая (розовый фон) эритема 1
Умеренно-выраженная эритема (розово - красный фон) 2
Выраженная эритема (красный фон) 3
Резко выраженная эритема (ярко-красная) 4
Отсутствие эритемы 0

б) Оценка отека кожи животных

Интенсивность отек

(увеличение толщины кожной складки, мм)

Оценка в

баллах

Отсутствие (0) 0
Слабый (до 0,3) 1
Умеренный (0,4-0,6) 2
Выраженный (0,7-1,0) 3
Резко выраженный (>1,0) 4

Величина отёка определяли путем измерения толщины кожной складки (в мм) при помощи толщиномера ТР-1-10. Оценку степени эритемы и отека суммировали для каждого подопытного животного, после чего вычисляли среднюю оценку выраженности раздражающего эффекта для группы экспериментальных животных.

Степень выраженности раздражающего действия вещества определяли по шкале оценки кожных проб (табл. 7).

Таблица 7

Шкала оценки аппликационных кожных тестов

Результат реакции Условное

обозначение

Описание реакции
Отрицательный _ Изменения кожи отсутствуют
Сомнительный ± Небольшая эритема без отёка
Слабоположительный + Наличие эритемы без отёка
Положительный ++ Эритема и отёк в месте аппликации
Резко

положительный

+++ В месте аппликации эритема, отёк,

папулы, изолированные везикулы

Очень резко

положительный

++++ В месте аппликации эритема, отёк,

папулы, сливающиеся везикулы

Исследование раздражающего действия на слизистую оболочку глаза проводили на кроликах-альбиносах одной линии обоего пола (40 животных). Не позднее, чем за 24 ч до начала исследования визуально оценивали состояния глаз каждого кролика, в опыт брали животных без патологических изменений. Изучаемый продукт закапывали в коньюктивальный мешок глаза в количестве 1 капли. В исследовании использовали растворы наноразмерных частиц серебра в концентрациях: 50 г/л, 10 г/л, 2 г/л; наноразмерных частиц цинка в концентрациях: 50 г/л, 10 г/л и наноразмерных частиц титана в концентрациях 500 г/л и 250 г/л.

Для постановки пробы одну каплю водного раствора испытуемого вещества вводили глазной пипеткой с вытянутым тонким концом под верхнее веко кролика, во второй глаз (контрольный) вводили 1 каплю воды. После внесения вещества прижимали на 1 минуту слезноносовой канал у внутреннего угла глаза. В условиях данного эксперимента применяли острое (однократное введение) растворов наноразмерных частиц серебра, цинка и титана диоксида.

Реакции коньюктивальной пробы учитывали через 15 мин (быстрая реакция) и через 24-48 часов (гиперчувствительность замедленного типа), ежедневно в течение 14 дней проводили наблюдение за состоянием коньюктивы и роговицы.

Регистрировали появление и выраженность гиперемии и отека слизистой оболочки глаз, инъекцию сосудов склеры и роговицы. Оценку повреждающего действия на слизистую оболочку глаза кролика проводили по степени гиперемии и отёка, количеству выделений, выраженной в бальной системе A. Majda и K. Chuscielska (таблица 8).

Сравнивали состояние слизистой оболочки глаза подопытных животных и животных контрольной группы. Баллы каждого наблюдения делили на общее число наблюдений, чтобы получить среднее значение в опытной и контрольной группах.

Таблица 8 Оценка повреждающего действия химических веществ на слизистые

оболочки глаза кролика по A. Majda и K. Chuscielska.

А. Гиперемия коньюктивы и роговицы
1. Сосуды иньецированы- 1 балл
2. Отдельные сосуды трудно различимы – 2 балла
3. Диффузное глубокое покраснение – 3 балла
Б. Отёк век
1. Слабый отек- 1 балл
2. Выраженный отек с частичным выворачиванием век- 2 балла
3. В результате отёка глаз закрыт наполовину- 3 балла
4. В результате отека глаз закрыт больше, чем наполовину- 4 балла
В. Выделение
1. Минимальное количество в углу глаза- 1 балл
2. Количество выделений увлажняет веки – 2 балла
3. Количество выделений увлажняет веки и окружающую кожу – 3 балла

<< | >>
Источник: Гуськова Оксана Альбертовна. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ЭКСПРЕСС-МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ ТОКСИЧЕСКИХ СВОЙСТВ НАНОМАТЕРИАЛОВ. ДИССЕРТАЦИЯ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА МЕДИЦИНСКИХ НАУК. Москва - 2014.

Еще по теме Исследование раздражающего действия in vivo на кожу и слизистые оболочки лабораторных животных:

  1. Исследование общетоксического действия in vivo на лабораторных животных
  2. Исследование раздражающего действия методом ультразвуковой допплерографии на сосудах хориоаллантоисной оболочки куриного эмбриона
  3. Оценка раздражающего действия в опытах in vivo
  4. Оценка раздражающего действия в опытах in vivo
  5. Оценка раздражающего действия в опытах in vivo
  6. Глава 3. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ОБЩЕТОКСИЧЕСКОГО И РАЗДРАЖАЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ НЧ СЕРЕБРА IN VIVO и IN VITRO
  7. ГЛАВА 4. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ОБЩЕТОКСИЧЕСКОГО И РАЗДРАЖАЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ НАНОРАЗМЕРНЫХ ЧАСТИЦ ЦИНКА В ЭКСПЕРИМЕНТАХ IN VIVO И IN VITRO
  8. ГЛАВА 5. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ОБЩЕТОКСИЧЕСКОГО И РАЗДРАЖАЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ НАНОРАЗМЕРНЫХ ЧАСТИЦ ТИТАНА ДИОКСИДА В ЭКСПЕРИМЕНТАХ IN VIVO И IN VITRO
  9. Результаты сравнительной оценки общетоксического и раздражающего действия в опытах in vivo и in vitro
  10. Результаты сравнительной оценки общетоксического и раздражающего действия в опытах in vivo и in vitro
  11. Результаты сравнительной оценки общетоксического и раздражающего действия в опытах in vivo и in vitro
  12. Морфологическое исследование слизистой оболочки пищевода
  13. Оценка морфологической структуры слизистой оболочки бронхов у больныхбронхиальной астмой
  14. Морфологическая характеристика слизистой оболочки пищевода больных ГЭРБ
  15. Морфологическая характеристика слизистой оболочки пищевода лиц контрольной группы
  16. Морфологическая характеристика слизистой оболочки пищевода у больных ГЭРБ с различным характером рефлюктата