2.2. Первый этап исследования
Целью первого этапа исследования являлась изучение влияния пробиотиков на основе Enterococcus faecium на активность пищеварительных ферментов. Объектом экспериментов являлись 36 белых лабораторных крыс- самцов линии Вистар, содержание, питание, уход за животными и выведение их из эксперимента которых, проводили строго в соответствии с правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных.
Лабораторные животные содержались при сходных условиях в отношении температуры, влажности, освещения и питания. До эксперимента все животные были распределены в 3 равные группы: А, Б и К. Крысам первых двух групп впервой половине дня per os в первые три дня вводили ампициллин в дозе 15 мг и метронидазол в дозе 10 мг чистого вещества, который был растворен в 500 мкл воды после дистилляции. Использованные дозы антибиотиков не являлись токсическими и лишь двукратно превосходили терапевтические для человека. После этого с 3 и по 9 день перорально крысам вводилась либо молочно - кислая закваска, содержащая 5,5·108 КОЕ/мл E.faecium L-5, либо молоко в количестве 0,5 мл. Животным контрольной группы первые три дня вводили воду после дистилляции в объеме 0,5 мл, а затем шесть дней — молоко в таком же объеме, что и для первых двух групп крыс 9. Штамм L-5 является генетичеcким дериватом пробиотической культуры (рисунок 6). L-3 («Ламинолакт», ООО «Авена», Россия, Патент РФ № 2227039), который в результате трансформации приобрел гены устойчивости к эритромицину [81], Этот штамм имеет сахаролитическими свойствами, в связи с чем, может расщеплять мальтозу. Срок эксперимента составил 9 дней.
крысы-самцы
Вистар (n=36)
А
(n=12)
Б
(n=12)
А
A
3-9 дни
Б Б
1–3-й дни
К К К
(n=12)
Рис.
6. Особенности воздействия на крыс групп А, Б и КВ последний день этой серии опытов, у животных отбирали пробы химуса, слизи и эпителия, для оценки активности фермента мальтазы (НФ
3.2.1.20) и морфологических изменениях слизистой оболочки, о которых судили по изменению массы эпителия слизистой оболочки в пробах, которые получали из отрезков кишки по 5 см. Определение активности мальтазы осуществляли в соответствии с методикой, описанной теми же авторами, и выражали в мкмоль/мин на участок кишки.
В ходе всей серии опытов проводилось наблюдение за двигательной активностью крыс, массой их тела, аппетитом и характером стула. В дни 1, 3 и
9 опыта проводился забор проб для проведения бактериологии микробиоты
двенадцатиперстной, тощей, подвздошной и толстой кишок в соответствии с существующими методическими рекомендациями. Проводился анализ трех видов материала, а именно просветного содержимого (химуса), пристеночной слизи и эпителия, которые получали по методике В.В. Егоровой и соавторов [27]. Из перечисленных отделов кишки животных отбирали по 2 смежных участка в 5 сантиметров. Химус получали промыванием сегментов кишки пятью миллилитрами охлажденного раствора Рингера с pH около 7. Слизь отделяли встряхиванием на протяжении 10 секунд участка кишечника, который был вывернут наружу слизистой и надет на пластиковую трубочку, в 5 миллилитрах р-ра Рингера. Затем с каждого фрагмента механическим путе при помощи шпателя снимали слизистую и гомогенизировали в 5 мл раствора Рингера (фракция эпителия).
Вышеперчисленные пробы брались для оценки активности фермента мальтазы (НФ 3.2.1.20) и морфологических изменениях слизистой оболочки, о которых судили по изменению массы эпителия слизистой оболочки в пробах. Активность мальтазы определялась для изучения влияния пробиотических микроорганизмов на функциональные показатели слизистой кишечника и, тем самым, на ее иммунологические характеристики. Мальтаза является сахаролитическим ферментом, который связан сапикальной мембраной энтероцитов и участвует в заключительных стадиях гидролиза углеводов, в частности гликогена и крахмала.
Определение активности мальтазы осуществляли в соответствии с методикой, описанной ранее, и выражали в мкмоль/мин на участок кишки [27]. До проведения этой методики производилось взвешивание фрагментов слизистой оболочки у всех лабораторных животных различных групп. Условия хранения биологических материалов до проведения методик –75 °С.
Еще по теме 2.2. Первый этап исследования:
- Оценка безопасности и переносимости отдельных компонентов вакцины у здоровых добровольцев (первый этап исследования)
- Обработка мокроты и стенки дыхательных путей (первый этап)
- 2.3. Второй этап исследования
- 3.2. Второй этап исследования
- 2.4. Третий этап исследования
- 3.3. Третий этап исследования
- Оценка безопасности и переносимости половинной дозы вакцины у здоровых добровольцев (второй этап исследования)
- Оценка безопасности и переносимости полной дозы вакцины у здоровых добровольцев (второй этап исследования)
- ПЕРВЫЙ ТУАЛЕТ НОВОРОЖДЕННОГО
- Первый показатель Вашего здоровья
- ПЕРВЫЙ ОПЫТ СОЗДАНИЯ РЕГИСТРА ПАЦИЕНТОВ С ИНТЕРСТИЦИАЛЬНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ЛЕГКИХ В Г. ИРКУТСКЕ