<<
>>

2.2. Первый этап исследования

Целью первого этапа исследования являлась изучение влияния пробиотиков на основе Enterococcus faecium на активность пищеварительных ферментов. Объектом экспериментов являлись 36 белых лабораторных крыс- самцов линии Вистар, содержание, питание, уход за животными и выведение их из эксперимента которых, проводили строго в соответствии с правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных.

Лабораторные животные содержались при сходных условиях в отношении температуры, влажности, освещения и питания. До эксперимента все животные были распределены в 3 равные группы: А, Б и К. Крысам первых двух групп в

первой половине дня per os в первые три дня вводили ампициллин в дозе 15 мг и метронидазол в дозе 10 мг чистого вещества, который был растворен в 500 мкл воды после дистилляции. Использованные дозы антибиотиков не являлись токсическими и лишь двукратно превосходили терапевтические для человека. После этого с 3 и по 9 день перорально крысам вводилась либо молочно - кислая закваска, содержащая 5,5·108 КОЕ/мл E.faecium L-5, либо молоко в количестве 0,5 мл. Животным контрольной группы первые три дня вводили воду после дистилляции в объеме 0,5 мл, а затем шесть дней — молоко в таком же объеме, что и для первых двух групп крыс 9. Штамм L-5 является генетичеcким дериватом пробиотической культуры (рисунок 6). L-3 («Ламинолакт», ООО «Авена», Россия, Патент РФ № 2227039), который в результате трансформации приобрел гены устойчивости к эритромицину [81], Этот штамм имеет сахаролитическими свойствами, в связи с чем, может расщеплять мальтозу. Срок эксперимента составил 9 дней.

крысы-самцы

Вистар (n=36)

А

(n=12)

Б

(n=12)

А

A

3-9 дни

Б Б

13-й дни

К К К

(n=12)

Рис.

6. Особенности воздействия на крыс групп А, Б и К

В последний день этой серии опытов, у животных отбирали пробы химуса, слизи и эпителия, для оценки активности фермента мальтазы (НФ

3.2.1.20) и морфологических изменениях слизистой оболочки, о которых судили по изменению массы эпителия слизистой оболочки в пробах, которые получали из отрезков кишки по 5 см. Определение активности мальтазы осуществляли в соответствии с методикой, описанной теми же авторами, и выражали в мкмоль/мин на участок кишки.

В ходе всей серии опытов проводилось наблюдение за двигательной активностью крыс, массой их тела, аппетитом и характером стула. В дни 1, 3 и

9 опыта проводился забор проб для проведения бактериологии микробиоты

двенадцатиперстной, тощей, подвздошной и толстой кишок в соответствии с существующими методическими рекомендациями. Проводился анализ трех видов материала, а именно просветного содержимого (химуса), пристеночной слизи и эпителия, которые получали по методике В.В. Егоровой и соавторов [27]. Из перечисленных отделов кишки животных отбирали по 2 смежных участка в 5 сантиметров. Химус получали промыванием сегментов кишки пятью миллилитрами охлажденного раствора Рингера с pH около 7. Слизь отделяли встряхиванием на протяжении 10 секунд участка кишечника, который был вывернут наружу слизистой и надет на пластиковую трубочку, в 5 миллилитрах р-ра Рингера. Затем с каждого фрагмента механическим путе при помощи шпателя снимали слизистую и гомогенизировали в 5 мл раствора Рингера (фракция эпителия).

Вышеперчисленные пробы брались для оценки активности фермента мальтазы (НФ 3.2.1.20) и морфологических изменениях слизистой оболочки, о которых судили по изменению массы эпителия слизистой оболочки в пробах. Активность мальтазы определялась для изучения влияния пробиотических микроорганизмов на функциональные показатели слизистой кишечника и, тем самым, на ее иммунологические характеристики. Мальтаза является сахаролитическим ферментом, который связан сапикальной мембраной энтероцитов и участвует в заключительных стадиях гидролиза углеводов, в частности гликогена и крахмала.

Определение активности мальтазы осуществляли в соответствии с методикой, описанной ранее, и выражали в мкмоль/мин на участок кишки [27]. До проведения этой методики производилось взвешивание фрагментов слизистой оболочки у всех лабораторных животных различных групп. Условия хранения биологических материалов до проведения методик –75 °С.

<< | >>
Источник: ДОНЕЦ Владимир Николаевич. ВОЗМОЖНОСТИ ПРОБИОТИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ ВНЕБОЛЬНИЧНЫХ ПНЕВМОНИЙ (КЛИНИКО-ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ). Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук. Санкт-Петербург –2015. 2015

Еще по теме 2.2. Первый этап исследования:

  1. Оценка безопасности и переносимости отдельных компонентов вакцины у здоровых добровольцев (первый этап исследования)
  2. Обработка мокроты и стенки дыхательных путей (первый этап)
  3. 2.3. Второй этап исследования
  4. 3.2. Второй этап исследования
  5. 2.4. Третий этап исследования
  6. 3.3. Третий этап исследования
  7. Оценка безопасности и переносимости половинной дозы вакцины у здоровых добровольцев (второй этап исследования)
  8. Оценка безопасности и переносимости полной дозы вакцины у здоровых добровольцев (второй этап исследования)
  9. ПЕРВЫЙ ТУАЛЕТ НОВОРОЖДЕННОГО
  10. Первый показатель Вашего здоровья
  11. ПЕРВЫЙ ОПЫТ СОЗДАНИЯ РЕГИСТРА ПАЦИЕНТОВ С ИНТЕРСТИЦИАЛЬНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ЛЕГКИХ В Г. ИРКУТСКЕ