<<
>>

Биохимические и культуральные методы идентификации МИКОБАКТЕРИЙ

Для идентификации НТМ разработан комплекс биохимических и куль­туральных тестов. Идентификация с использованием этих методов исследо­вания никогда не должна базироваться на единичных тестах или характери­стиках, так как отдельные штаммы могут давать отклонения от ожидаемых результатов тестирования, присущих данному виду.

Сочетание характерных морфологических признаков с результатами биохимических и культураль­ных тестов позволяет провести идентификацию микобактерий с высокой точностью.

Культуральная характеристика микобактерий. Микобактерии раз­множаются медленно: колонии быстрорастущих НТМ на яичных питатель­ных средах обычно появляются через 4-7 дней, медленнорастущих — через 21-56 дней.

Типичные культуры M. tuberculosis,выросшие на плотных питатель­ных средах, — восковидные, сухие, морщинистые, растут в виде R-колоний (от англ. rough — грубый, шершавый), не пигментированы (кремового цвета или цвета слоновой кости). НТМ обычно формируют гладкие S-колонии (от англ. smooth— гладкий) с влажным ростом, которые могут иметь кремо­вую, белую или интенсивную желтую или оранжевую окраску.

Ниациновый тест — основной тест, используемый для идентифика­ции M. tuberculosis.Ниацин (производное никотиновой кислоты) продуци­руют все микобактерии, однако у M. tuberculosisв результате блокирования ряда метаболических путей никотиновая кислота накапливается в больших количествах, во много раз превышающих ее содержание в клетках микобак­терий других видов. Для выполнения теста в пробирку с суспензией культу­ры микобактерий помещают индикаторную полоску. Положительный ре­зультат — экстракт окрашивается в желтый цвет разной интенсивности; от­рицательный результат — нет окрашивания жидкости.

Нитратредуктазный тест. Принцип метода заключается в определе­нии активности нитратредуктазы по количеству нитрита, восстановленного из нитрата, что сопровождается цветной реакцией.

Реакция восстановления нитратов дает возможность дифференцировать M. tuberculosis,у которых нитратредуктазная активность выражена больше, чем у остальных микобак­терий, от большинства НТМ, у которых этот фермент отсутствует. Несколь­ко видов НТМ (M. kansasii, M. terrae, M. fortuitum)обладают нитратредук- тазной активностью.

Для выполнения теста в пробирку с суспензией культуры микобакте­рий добавляют раствор нитрата натрия, инкубируют в течение 2 ч при 37 °С. После этого в пробирку добавляют по каплям раствор соляной кислоты, сульфаниламида, N-нафтилэтилендиамина. Положительный результат: крас­ное окрашивание (оттенки от розового до темно-красного). Отрицательный результат — нет окрашивания.

Тест с пара-нитробензойной кислотой (ПНБ-тест). Пара-нитробен- зойная кислота оказывает ингибирующее действие на рост МБТ. Для выпол­нения теста готовят яичную среду с ПНБ, засевают суспензию микобактерий в пробирку с ПНБ и контрольную пробирку, не содержащую ПНБ. Пробирки инкубируют при 37 °С в течение 28 сут.

Если в обеих пробирках отмечается обильный рост, то исследуемый штамм принадлежит к НТМ. Если в контрольной пробирке отмечается обильный рост, а в пробирке с ПНБ — отсутствие роста или рост единичных колоний, то исследуемый штамм принадлежит к комплексу M. tuberculosis.

<< | >>
Источник: Микобактериозы легких : учебно-методическое пособие / Г. Л. Бородина [и др.]. - Минск : БГМУ,2018. - 30 с.. 2018

Еще по теме Биохимические и культуральные методы идентификации МИКОБАКТЕРИЙ:

  1. Молекулярно-генетическая идентификация микобактерий
  2. БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
  3. Результаты биохимических методов исследования
  4. Глава Vl МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ РЕСПИРАТОРНЫХ И КИШЕЧНЫХ ВИРУСОВ
  5. СЛОЖНОСТИ ИДЕНТИФИКАЦИИ BURKHOLDERIA CEPACIA COMPLEX С ПОМОЩЬЮ СТАНДАРТНЫХ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ
  6. Культуральные свойства грибов
  7. Иммунохроматографическая идентификация комплекса
  8. Микроскопическая характеристика микобактерий
  9. Патогенные микобактерии
  10. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА И КЛАССИФИКАЦИЯ МИКОБАКТЕРИЙ
  11. Биохимические исследования
  12. Идентификация международных эпидемических клонов возбудителей ИСМП.
  13. 2.3.8. Биохимические исследования.