Биохимические и культуральные методы идентификации МИКОБАКТЕРИЙ
Для идентификации НТМ разработан комплекс биохимических и культуральных тестов. Идентификация с использованием этих методов исследования никогда не должна базироваться на единичных тестах или характеристиках, так как отдельные штаммы могут давать отклонения от ожидаемых результатов тестирования, присущих данному виду.
Сочетание характерных морфологических признаков с результатами биохимических и культуральных тестов позволяет провести идентификацию микобактерий с высокой точностью.Культуральная характеристика микобактерий. Микобактерии размножаются медленно: колонии быстрорастущих НТМ на яичных питательных средах обычно появляются через 4-7 дней, медленнорастущих — через 21-56 дней.
Типичные культуры M. tuberculosis,выросшие на плотных питательных средах, — восковидные, сухие, морщинистые, растут в виде R-колоний (от англ. rough — грубый, шершавый), не пигментированы (кремового цвета или цвета слоновой кости). НТМ обычно формируют гладкие S-колонии (от англ. smooth— гладкий) с влажным ростом, которые могут иметь кремовую, белую или интенсивную желтую или оранжевую окраску.
Ниациновый тест — основной тест, используемый для идентификации M. tuberculosis.Ниацин (производное никотиновой кислоты) продуцируют все микобактерии, однако у M. tuberculosisв результате блокирования ряда метаболических путей никотиновая кислота накапливается в больших количествах, во много раз превышающих ее содержание в клетках микобактерий других видов. Для выполнения теста в пробирку с суспензией культуры микобактерий помещают индикаторную полоску. Положительный результат — экстракт окрашивается в желтый цвет разной интенсивности; отрицательный результат — нет окрашивания жидкости.
Нитратредуктазный тест. Принцип метода заключается в определении активности нитратредуктазы по количеству нитрита, восстановленного из нитрата, что сопровождается цветной реакцией.
Реакция восстановления нитратов дает возможность дифференцировать M. tuberculosis,у которых нитратредуктазная активность выражена больше, чем у остальных микобактерий, от большинства НТМ, у которых этот фермент отсутствует. Несколько видов НТМ (M. kansasii, M. terrae, M. fortuitum)обладают нитратредук- тазной активностью.Для выполнения теста в пробирку с суспензией культуры микобактерий добавляют раствор нитрата натрия, инкубируют в течение 2 ч при 37 °С. После этого в пробирку добавляют по каплям раствор соляной кислоты, сульфаниламида, N-нафтилэтилендиамина. Положительный результат: красное окрашивание (оттенки от розового до темно-красного). Отрицательный результат — нет окрашивания.
Тест с пара-нитробензойной кислотой (ПНБ-тест). Пара-нитробен- зойная кислота оказывает ингибирующее действие на рост МБТ. Для выполнения теста готовят яичную среду с ПНБ, засевают суспензию микобактерий в пробирку с ПНБ и контрольную пробирку, не содержащую ПНБ. Пробирки инкубируют при 37 °С в течение 28 сут.
Если в обеих пробирках отмечается обильный рост, то исследуемый штамм принадлежит к НТМ. Если в контрольной пробирке отмечается обильный рост, а в пробирке с ПНБ — отсутствие роста или рост единичных колоний, то исследуемый штамм принадлежит к комплексу M. tuberculosis.
Еще по теме Биохимические и культуральные методы идентификации МИКОБАКТЕРИЙ:
- Молекулярно-генетическая идентификация микобактерий
- БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
- Результаты биохимических методов исследования
- Глава Vl МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ РЕСПИРАТОРНЫХ И КИШЕЧНЫХ ВИРУСОВ
- СЛОЖНОСТИ ИДЕНТИФИКАЦИИ BURKHOLDERIA CEPACIA COMPLEX С ПОМОЩЬЮ СТАНДАРТНЫХ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ
- Культуральные свойства грибов
- Иммунохроматографическая идентификация комплекса
- Микроскопическая характеристика микобактерий
- Патогенные микобактерии
- ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА И КЛАССИФИКАЦИЯ МИКОБАКТЕРИЙ
- Биохимические исследования
- Идентификация международных эпидемических клонов возбудителей ИСМП.
- 2.3.8. Биохимические исследования.