<<
>>

Микробиологические методы выделения возбудителей инфекционных осложнений

В ходе работы проводили исследование проб клинического материала (крови, мокроты, бронхоальвеолярной жидкости, мочи, раневого отделяемо- го, ликвора, плевральной жидкости, выпота из брюшной полости), подклю- чичных и мочевых катетеров, мазков со слизистой носовых ходов и кожи локтевого сгиба медицинского персонала и пациентов, воздуха, смывов с по-

верхностей и узлов аппаратов искусственной вентиляции легких и объектов госпитальной среды в отделении интенсивной терапии.

Взятие материала и транспортирование в лабораторию осуществлялось в соответствии с МУ 4.2.2039-05 «Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микро- биологические лаборатории», утвержденным Главным государственным са- нитарным врачом РФ 23 декабря 2005 г. (введены 1 июля 2006 года).

Организация микробиологических исследований соответствовала тре- бованиям руководства по санитарной микробиологии (2006) и методически- ми рекомендациями по микробиологической диагностике раневых инфекций в лечебно-диагностических учреждениях армии и флота (1999), утвержден- ных начальником ГВМУ МО РФ, другим нормативно-правовым документам. Она включала проведение разъяснительной работы с врачами и медицински- ми сестрами; забор проб в условиях, исключающих контаминацию; доставку проб в микробиологическую лабораторию; проведение посевов на питатель- ные среды; идентификацию и исследование чувствительности возбудителей к антибиотикам. Для исследования чувствительности возбудителей приме- няли диско-диффузионный метод. Контроль качества постановки чувстви- тельности проводили 1 раз в неделю с помощью референс-штаммов микро- организмов Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853. Грамположительные кокки дифферен- цировали по наличию каталазы, грамотрицательные – цитохромоксидазы. В тот же день идентификацию возбудителей продолжали, используя набор те- стов: для стафилококков – наличие плазмокоагулазы; энтерококков – редук- ция метиленового синего; грамотрицательных палочек и кокков – способ- ность к окислению и ферментации глюкозы, способ роста на средах Симмон- са и Клиглера. Это давало возможность выявить среди них S.

aureus и группу коагулазоотрицательных стафилококков (Staphylococcus spp.), представите- лей рода Enterococcus, Pseudomonas, Acinetobacter и семейства Enterobacteri- aceae. Микробиологические исследования проводились совместно с докто- ром биологических наук, старшим научным сотрудником Т.Н. Суборовой.

Генетическое типирование штаммов P. aeruginosa по методу RAPD- ПЦР проводилось совместно с кандидатом медицинских наук А.Е. Гончаро- вым. Для сравнения использовали культуры 219 и 1186, отнесенные к кло- нальным линиям А и С. Бактерии выращивали на плотной среде АГВ. Ге- номную ДНК выделяли обработкой суспензии бактерий (3-4 колонии поме- щали бактериологической петлей в 100 мкл стерильной воды в течение 15 минут при 95 ºС). После центрифугирования надосадочный раствор исполь- зовали в качестве образца ДНК. ПЦР-амплификацию проводили в 50 мкл ре- акционной смеси, куда вносили 5 мкл образца ДНК, 10 мкл праймера (из ра- бочего раствора 5 пмоль/мкл) и 34 мкл мастер-микс. Электрофорез амплико- нов проводили в 1,7 % геле агарозы в однократном ТБЕ буфере, в качестве молекулярного маркера брали 100bp DNA ladder (ООО «СибЭнзим»). Визуа- лизацию полос осуществляли после окрашивания геля бромистым этидием (5мкг/мл) с применением системы документации BioDocAnalyze (Biometra, Германия). Сравнительный анализ спектров амплифицированной ДНК оце- нивали визуально, без учета полиморфизма видимых RAPD-полос. Эпиде- миологический мониторинг циркулирующих в стационаре антибиотикорези- стентных штаммов условно-патогенных микроорганизмов осуществляли с помощью программы «Whonet» 5.4.

<< | >>
Источник: КУЗИН Александр Александрович. ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ И КЛИНИКО-ОРГАНИЗАЦИОННЫЕ ОСНОВЫ ПРОФИЛАКТИКИ ИНФЕКЦИЙ, СВЯЗАННЫХ С ОКАЗАНИЕМ МЕДИЦИНСКОЙ ПОМОЩИ РАНЕНЫМ И ПОСТРАДАВШИМ С ТЯЖЕЛЫМИ ТРАВМАМИ. Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук. Санкт-Петербург –2014. 2014

Еще по теме Микробиологические методы выделения возбудителей инфекционных осложнений:

  1. Особенности спектра и частоты выделения возбудителей инфекционных осложнений у раненых и пострадавших с тяжелыми травмами
  2. Глава 5. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ ИНФЕКЦИОННЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ У ПАЦИЕНТОВ СПЕЦИАЛИЗИРОВАННОГО ХИРУРГИЧЕСКОГО СТАЦИОНАРА
  3. Этиологическая структура инфекционных осложнений тяжелых травм и характеристика возбудителей
  4. Клинико-эпидемиологический метод выявления инфекционных осложнений
  5. Глава 7. СИСТЕМНЫЕ МЕТОДЫ ПРОФИЛАКТИКИ ИНФЕКЦИОННЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ У ПАЦИЕНТОВ С ТЯЖЕЛЫМИ ТРАВМАМИ
  6. Глава 3. СОВРЕМЕННЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, СИСТЕМНЫЕ ПРИНЦИПЫ И МЕТОДЫ МОНИТОРИНГА И ОЦЕНКИ РАСПРОСТРАНЕНОСТИ ИНФЕКЦИОННЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ ПРИ ТЯЖЕЛЫХ ТРАВМАХ
  7. Глава Vl МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ РЕСПИРАТОРНЫХ И КИШЕЧНЫХ ВИРУСОВ
  8. ИЗУЧЕНИЕ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ПЕЙЗАЖА ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ТЯЖЕЛОЙ ВНЕБОЛЬНИЧНОЙ ПНЕВМОНИИ В КЛИНИКЕ БГМУ И ТАКТИЧЕСКИЕ ВОПРОСЫ РАЦИОНАЛЬНОГО ПРИМЕНЕНИЯ АНТИБАКТЕРИАЛЬНОЙ ТЕРАПИИ
  9. ПНЕВМОНИИ КАК ОСЛОЖНЕНИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ И НЕИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
  10. Патогенетические закономерности развития инфекционных осложнений травматической болезни
  11. Эпидемиологические и клинические проявления инфекционных осложнений при тяжелых повреждениях
  12. Глава 2.3. Чувствительность к возбудителям инфекционных болезней у отдельных этнических групп и человеческих популяций
  13. Тема 3. ЖИВЫЕ ПЕРЕНОСЧИКИ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ И МЕРЫ БОРЬБЫ С НИМИ.
  14. Характеристика клинических проявлений инфекционных осложнений у пациентов с тяжелыми травмами
  15. СЛОЖНОСТИ ИДЕНТИФИКАЦИИ BURKHOLDERIA CEPACIA COMPLEX С ПОМОЩЬЮ СТАНДАРТНЫХ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ
  16. Клинико-эпидемиологические факторы риска инфекционных осложнений у пациентов с тяжелыми травмами
  17. Клинико-патогенетические факторы риска инфекционных осложнений у раненых и пострадавших с тяжелыми травмами
  18. Особенности этиологической структуры инфекционных осложнений у пациентов разных отделений и в зависимости от исхода лечения
  19. Факторы риска возникновения инфекционных осложнений при тяжелых повреждениях в госпитальных условиях