<<
>>

Исследование напряженности поствакцинального клеточного иммунного ответа у здоровых добровольцев

3.2.2.1. Исследование напряженности клеточного иммунного ответа у здоровых добровольцев после вакцинации по гликопротеин-специфической пролиферации лимфоцитов in vitro

Известно, что ключевым свойством адаптивного иммунного ответа является способность клонов антиген-специфичных лимфоцитов пролиферировать и дифференцироваться в эффекторные клетки.

Таким образом, количество пролиферирующих лимфоцитов в ответ на введение антигена будет отражать напряженность формирующегося клеточного иммунитета.

Напряженность клеточного иммунитета здоровых добровольцев иммунизированных Г амЭвак-Комби оценивали по количеству пролиферирующих CD4+ и CD8+ лимфоцитов периферической крови в культуре in vitroпосле повторной стимуляции клеток рекомбинантным белком GP вируса Эбола. Для определения количества пролиферирующих CD4+ и CD8+ лимфоцитов использовали метод окраски клеток красителем CFSE.

Результаты определения процента пролиферирующих CD4+ и CD8+ Т лимфоцитов на 0 день (до иммунизации) и на 28 и 42 день исследования, после иммунизации здоровых добровольцев половиной дозой комбинированной векторной вакцины против лихорадки Эбола, а также среднее арифметрическое значение представлены графически на рисунках 11 и 12, соответственно.

Также индивидуальные данные, представляющие проценты пролиферирующих CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов на 0 день (до иммунизации) и на 28 и 42 день исследования после иммунизации здоровых добровольцев половиной дозой комбинированной векторной вакцины против лихорадки Эбола, представлены в Таблице 19.

Рисунок 11. Процент пролиферирующих CD4+ Т-лимфоцитов на 0 день (до иммунизации) и на 28 и 42 день исследования, после иммунизации здоровых добровольцев половиной дозой комбинированной векторной вакцины против лихорадки Эбола, (1 когорта).

Среднее арифметическое значение представлено в виде красной черты для каждой группы данных.

Рисунок 12. Процент пролиферирующих CD8+ Т-лимфоцитов на 0 день (до иммунизации) и на 28 и 42 день исследования, после иммунизации здоровых добровольцев половиной дозой «Комбинированная векторная вакцина против лихорадки Эбола (1 когорта). Среднее арифметическое значение представлено в виде красной черты для каждой группы данных.

Из результатов, представленных в Таблице 19, можно увидеть, что 1/2 дозы вакцины, вызывает формирование Т-специфического клеточного иммунитета, как CD4+, так и CD8+.

Основной пик напряженности клеточного иммунитета, вызванного иммунизацией здоровых добровольцев вакциной, согласно среднему арифметическому значению процента пролиферирующих Т-лимфоцитов наблюдался на 28 день после иммунизации. Так, процент пролиферирующих CD4+ Т-лимфоцитов на 28 день составил 0,86% и на 42 день 0,40%. Пролиферация CD8+ Т-лимфоцитов на 28 день составила 0,49%, а на 42 день 0,30%.

Таблица 19. Процент пролиферирующих CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов на 0 день (до иммунизации) и на 28 и 42 день исследования после иммунизации здоровых добровольцев половиной дозой комбинированной векторной вакцины против лихорадки Эбола (1 когорта)

№ п/п 0 день 28 день 42 день
Процент пролиферирующих Т-лимфоцитов
CD4+ CD8+ CD4+ CD8+ CD4+ CD8+
1 0 0 0,7 0 0 0
2 0 0 0,7 0 0 0
3 0 0 0,5 0,4 0 1,4
4 0,1 0,1 0,5 1,2 0 0,6
5 0 0 2,5 1,6 0,3 0
6 0 0 0 0,1 0,2 0,2
7 0 0 0 0,8 0 0
8 0,1 0,1 2,2 0,8 0 0
9 0 0 0 0,1 0,2 0
10 0 0 0,2 0 0 1,5
11 0 0 1,1 0,6 0 0
12 0 0 1,5 0,4 0 0
13 0 0 2,7 0,4 1,1 0,1
14 0 0 0,4 0,3 0 0,2
15 0 0 1,3 1 0,9 0
16 0,3 0 1,1 0 0 0
17 0 0 0,5 0,2 0,1 1,1
18 0 0,1 4,2 0 0 0
19 0,2 0,2 0 0,9 0,3 0
20 0 0 0 0,7 0 0
21 0 0 0,6 0 0 0
22 0 0 0,9 0 0 0
23 0 0 0,6 0,6 0,6 0,2
24 0 0 0,6 0,1 0 0,1
25 0 0 0,8 0,1 1,8 0
26 0 0 0,3 3,3 2,8 1,5
27 0,1 0,1 0,6 0,3 2,3 1,3
28 0 0 0,2 0,7 0 0
29 0,1 0,1 0,4 0 0 0,3
30 0 0 0,7 0,2 1,5 0,6

Процент здоровых добровольцев, иммунизированных вакциной, в пробах которых был зарегистрирован пролиферативный ответ CD4+ Т-лимфоцитов после добавления антигена GP вируса Эбола на 28 день после иммунизации, составил 83% (25 пациентов из 30), а CD8+ Т-лимфоцитов - 73,3% (22 пациентов из 30).

На 42 день после иммунизации процент здоровых добровольцев, иммунизированных вакциной, в пробах которых был зарегистрирован пролиферативный ответ CD4+ Т-лимфоцитов, составил 40% (12 пациентов из 30), а CD8+ Т-лимфоцитов - 43,3% (13 пациентов из 30).

Результаты определения процента пролиферирующих CD4+ и CD8+ Т лимфоцитов на 0 день (до иммунизации) и на 28 и 42 день исследования, после иммунизации здоровых добровольцев одной полной дозой вакцины (2 когорта), а также среднее арифметическое значение представлены графически на рисунках 13 и 14, соответственно.

Рисунок 13. Процент пролиферирующих CD4+ Т-лимфоцитов на 0 день (до иммунизации) и на 28 и 42 день исследования, после иммунизации здоровых добровольцев одной полной дозой комбинированной векторной вакцины против лихорадки Эбола, (2 когорта). Среднее арифметическое значение представлено в виде красной черты для каждой группы данных.

Рисунок 14. Процент пролиферирующих CD8+ Т-лимфоцитов на 0 день (до иммунизации) и на 28 и 42 день исследования, после иммунизации здоровых добровольцев одной полной дозой комбинированной векторной вакцины против лихорадки Эбола, (2 когорта). Среднее арифметическое значение представлено в виде красной черты для каждой группы данных.

Также данные, представляющие проценты пролиферирующих CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов на 0 день (до иммунизации) и на 28 и 42 день исследования после иммунизации здоровых добровольцев одной полной дозой комбинированной векторной вакцины против лихорадки Эбола (2 когорта), представлены в таблице 20.

Из результатов, представленных на рисунках 12 и 13, а также в таблице 20 видно, что комбинированная векторная вакцина ГамЭвак-Комби, в полной дозе вызывает формирование антиген-специфических Т-лимфоцитов (как CD4+, так и CD8+).

Таблица 20.

Процент пролиферирующих CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов на 0 день (до иммунизации) и на 28 и 42 день исследования, после иммунизации здоровых добровольцев одной полной дозой комбинированной векторной вакцины против лихорадки Эбола (2 когорта)
№ п/п 0 день 28 день 42 день
Процент пролифери] рующих Т-лимфоцитов
CD4+ CD8+ CD4+ CD8+ CD4+ CD8+
1 0 0 2,9 1,1 0,1 0,4
2 0 0 0,2 0,2 0,0 0,0
3 0 0 0,7 0,0 0,5 0,1
4 0 0 0,0 0,0 0,8 0,1
5 0,1 0,1 0,5 0,6 0,0 0,1
6 0 0 0,3 0,2 0,4 0,4
7 0 0 0,0 1,7 0,3 0,0
8 0 0 0,8 0,8 0,2 0,1
9 0,1 0,1 2,2 0,0 0,2 0,1
10 0 0 0,7 0,8 0,3 0,3
11 0 0 0,5 0,3 0,3 0,0
12 0 0 0,5 0,3 0,4 0,3
13 0 0 2,5 0,2 0,6 0,0
14 0 0 0,8 3,8 0,4 0,2
15 0 0 2,2 0,0 0,4 0,1
16 0 0 0,0 0,0 0,0 0,0
17 0 0 3,7 1,5 0,3 0,1
18 0 0 1,1 0,9 0,0 0,0
19 0 0 1,5 0,0 0,5 0,0
20 0,2 0,2 2,7 0,6 0,8 0,0
21 0 0 0,4 0,0 0,0 0,8
22 0 0 1,3 0,0 0,7 1,0
23 0 0,2 1,1 0,0 1,7 0,2
24 0 0 0,5 2,7 1,8 0,0
25 0 0 4,2 0,0 0,0 0,3
26 0 0 0,0 2,8 0,5 0,0
27 0 0 0,0 0,2 0,2 0,3
28 0,1 0,1 0,6 0,0 0,0 0,0
29 0 0 0,9 0,0 1,6 2,4

Основной пик напряженности клеточного иммунитета, вызванного иммунизацией здоровых добровольцев, согласно среднему арифметическому значению процента пролиферирующих Т-лимфоцитов наблюдался на 28 день после иммунизации. Так, процент пролиферирующих CD4+ Т-лимфоцитов на 28 день составил 1,03% и на 42 день 0,44%. Пролиферация CD8+ Т-лимфоцитов на 28 день составила 0,61%, а на 42 день 0,24%.

Процент здоровых добровольцев, иммунизированных одной полной дозой вакцины, в пробах которых был зарегистрирован пролиферативный ответ CD4+ Т-лимфоцитов после добавления антигена GP вируса Эбола на 28 день после иммунизации, составил 82,7% (24 пациентов из 29), а CD8+ Т-лимфоцитов - 58,6% (17 пациентов из 29). На 42 день после иммунизации процент здоровых добровольцев иммунизированных вакциной, в пробах которых был зарегистрирован пролиферативный ответ CD4+ Т-лимфоцитов 75,9% (22 пациентов из 29), а CD8+ Т-лимфоцитов - 62,1% (18 пациентов из 29).

3.2.2.2. Исследование напряженности клеточного иммунного ответа у здоровых добровольцев после вакцинации по гликопротеин-специфической продукции ИФН- гамма лимфоцитами in vitro

Известны данные, свидетельствующие о том, что продукция лимфоцитами (Т-клетками) ИФН-гамма прямо пропорциональна напряженности формирующегося клеточного иммунного ответа при проведении вакцинации. Таким образом, одним из индикаторов интенсивности формирования клеточного иммунного ответа может служить измерение количества вырабатываемого Т лимфоцитами ИФН-гамма в клеточных тестах in vitro.

Клеточный иммунитет при введении комбинированной вакцины оценивали по индукции экспрессии ИФН-гамма мононуклеарными клетками периферической крови (МКПК) иммунизированных лекарственным средством «Комбинированная векторная вакцина против лихорадки Эбола» здоровых добровольцев в ответ на стимуляцию гликопротеином GP вируса Эбола

актуального штамма (субтип Заир, штамм H.sapiens-wt/GIN/2014/Kissidougou- C15).

Результаты анализа специфического клеточного ответа на введение ГамЭвак-Комби, (1 когорта - ½ дозы, 2 когорта - целая доза) представлены на рисунке 15 и в таблицах 21 и 22 в виде прироста концентрации ИФН-гамма (разы) при сравнении стимулированных рекомбинантным белком GP вируса Эбола МКПК и интактных. В Таблице 23 представлены обощенные данные (медиана, нижний и верхний квартили, минимальное и максимальное значение, среднее значение и стандартное отклонение) по приросту экспрессии ИФН-гамма (разы) МКПК в ответ на стимуляцию рекомбинантным гликопротеином вируса Эбола.

Рисунок 15. Прирост концентрации гамма-ИФН в среде после стимуляции МКПК вакцинированных людей (1/2 дозы и 1 доза). На рисунке отмечены медиана, верхний и нижний квартили.

Таблица 21. Результаты прироста концентрации ИФН-гамма в среде после стимуляции МКПК (рекомбинантным GP вируса Эбола и ФГА) добровольцев, иммунизированных половинной дозой комбинированной векторной вакцины

против лихорадки Эбола, на 0, 28 и 42 день исследования (когорта 1)

Шифр добровольца Прирост концентрации ИФН-гамма в среде после стимуляции МКПК
Стимуляция GP Стимуляция ФГА
0,5 дозы,

0 день

0,5 дозы,

28 день

0,5 дозы,

42 день

0,5 дозы, 0 день 0,5 дозы,

28

день

0,5 дозы,

42

день

1 1,32 15,75 18,56 5,22 13,65 12,49
2 2,48 60,12 33,82 7,92 1,00 16,66
3 1,21 5,74 2,81 6,48 5,29 2,91
4 1,33 10,95 6,48 4,30 1,81 1,93
5 1,81 2,71 1,33 6,46 2,95 1,61
6 1,44 33,12 24,43 6,56 24,76 13,19
7 1,54 25,51 22,74 15,40 22,62 19,29
8 1,64 15,60 8,04 7,98 9,13 7,30
9 1,23 5,42 3,67 6,48 4,81 3,62
10 2,02 75,82 27,90 6,75 2,08 17,37
11 1,73 4,30 4,28 4,09 2,47 2,64
12 1,00 15,92 10,99 1,81 0,57 7,14
13 1,00 20,84 10,38 12,49 14,38 14,58
14 1,00 49,12 57,30 8,94 42,19 49,37
15 1,59 21,66 16,52 3,43 1,58 3,65
16 1,57 8,84 10,49 8,06 8,15 9,01
17 1,81 7,27 2,77 8,71 7,16 2,17
18 1,23 21,89 14,53 15,43 18,73 4,40
19 1,00 3,46 2,39 4,98 2,61 1,93
20 1,00 39,46 30,91 10,14 41,74 23,45
21 2,32 17,08 22,16 10,96 12,99 18,79
22 1,00 26,21 8,86 2,02 2,40 1,29
23 1,30 14,28 5,67 4,43 1,30 5,38
24 4,22 41,47 15,70 7,70 0,69 9,56
25 1,00 1,00 1,00 1,45 1,00 1,21
26 1,03 6,67 4,39 1,72 1,00 10,96
27 1,00 62,75 30,55 5,90 59,38 23,51
28 1,04 4,56 2,51 4,98 4,13 2,26
29 2,34 36,27 19,47 7,37 25,63 24,35
30 1,00 2,19 1,01 2,12 1,60 1,46

Таблица 22. Результаты прироста концентрации ИФН-гамма в среде после стимуляции МКПК (рекомбинантным GP вируса Эбола и ФГА) добровольцев, иммунизированных одной полной дозой комбинированной векторной вакцины против лихорадки Эбола, на 0, 28 и 42 день исследования (полная доза мл,

когорта 2)

Шифр добровольца Прирост концентрации ИФН-гамма в среде после стимуляции МКПК
Стимуляция GP Стимуляция ФГА
1 доза,

0 день

1 доза,

28 день

1 доза,

42 день

1 доза,

0 день

1 доза,

28 день

1 доза,

42 день

1 1,61 38,48 17,76 1,00 18,10 18,41
2 1,00 23,29 12,24 9,57 14,47 7,93
3 1,09 7,45 3,89 8,36 3,37 1,38
4 1,00 2,42 3,16 2,21 5,92 6,60
5 1,00 12,50 12,86 11,55 2,44 1,46
6 1,35 86,54 45,12 1,96 25,67 34,28
7 1,00 40,95 30,25 4,35 11,55 13,99
8 1,00 2,12 2,21 2,69 1,97 2,17
9 1,00 2,80 2,59 5,21 1,51 1,24
10 1,00 27,28 14,53 2,65 14,56 11,56
11 2,13 39,30 23,00 1,61 6,59 17,46
12 1,46 68,55 51,12 2,52 50,63 37,33
13 1,42 6,35 3,72 2,56 2,25 2,97
14 1,00 25,68 20,64 8,87 28,11 23,43
15 1,46 7,75 5,11 1,87 5,99 2,56
16 1,00 32,58 20,46 7,34 13,78 17,88
17 1,93 57,12 24,44 2,17 35,30 22,50
18 1,00 22,57 15,18 5,82 13,62 19,45
19 2,42 88,55 59,04 2,19 12,45 9,50
20 1,00 15,62 4,52 3,06 4,32 3,91
21 1,37 3,31 2,85 1,67 2,91 2,47
22 1,00 6,62 3,85 4,00 2,89 2,06
23 1,61 4,02 2,85 1,42 3,12 1,54
24 1,05 72,75 48,96 5,61 43,39 40,82
25 1,00 34,34 20,94 5,40 18,08 16,66
26 1,00 18,10 11,17 4,74 10,89 9,40
27 1,68 15,20 10,86 3,92 7,96 9,32
28 1,00 27,48 13,13 2,79 12,59 7,04
29 1,00 14,11 12,01 5,43 7,55 6,76

Таблица 23. Обобщенные данные (медиана, нижняя и верхняя квартили, минимальное и максимальное значение, среднее значение и стандартное отклонение) по приросту экспрессии ИФН-гамма (разы) МКПК в ответ на стимуляцию рекомбинантным гликопротеином вируса Эбола.

Группа 1 Группа 2
0,5 дозы 1 доза
0 день 28 день 42 день 0 день 28 день 42 день
Минимум 1,000 1,000 1,000 1,000 2,120 2,214
Нижняя квартиль 1,000 5,661 3,456 1,000 7,034 3,870
Медиана 1,311 15,83 10,44 1,000 22,57 12,86
Верхняя квартиль 1,747 33,91 22,30 1,458 38,89 21,97
Максимум 4,216 75,82 57,30 2,422 88,55 59,04
Среднее значение 1,506 21,87 14,05 1,261 27,72 17,19
Стандартное отклонение 0,6765 19,86 12,95 0,3899 25,26 15,87

Специфический Т-клеточный ответ на 28 день после первой иммунизации (на 7 день после второй иммунизации) составил (в приросте концентрации ИФН- гамма) по медиане 15,83 (разброс значений от 1 до 75,82) у добровольцев 1 когорты (1/2 дозы), и 22,57 (разброс значений от 2,12 до 88,55) у добровольцев 2 когорты (1 доза). На 42 день значения были следующими: 10,44 (разброс значений от 1 до 57,3) у добровольцев 1 когорты (1/2 дозы), и 12,86 (разброс значений от 2,214 до 59,04) у добровольцев 2 когорты (1 доза). Т-клеточный ответ был выше у добровольцев, которым вводили полную дозу вакцины. У всех добровольцев 2 когорты на 28 и 42 день исследования наблюдался специфический Т-клеточный ответ.

В результате исследования было показано, что введение комбинированной вакцины приводит к высокому уровню индукции экспрессии ИФН-гамма мононуклеарными клетками периферической крови добровольцев при стимуляции рекомбинантным белком GP вируса Эбола актуального штамма

(субтип Заир, штамм H.sapiens-wt/GIN/2014/Kissidougou-C15), что свидетельствует о формировании специфического Т-клеточного иммунитета.

3.2.3.

<< | >>
Источник: Токарская Елизавета Александровна. Оценка иммуногенности и безопасности генно-инженерной векторной вакцины против болезни, вызванной вирусом Эбола, у здоровых добровольцев. ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук. Москва - 2019. 2019

Еще по теме Исследование напряженности поствакцинального клеточного иммунного ответа у здоровых добровольцев:

  1. Исследование напряженности поствакцинального гуморального иммунного ответа у здоровых добровольцев
  2. Исследования поствакцинального иммунного ответа у здоровых добровольцев
  3. Исследования поствакцинального иммунного ответа у здоровых добровольцев
  4. Исследование длительности поствакцинального гуморального иммунного ответа у здоровых добровольцев
  5. Исследование влияния предсуществующего иммунного ответа к аденовирусному вектору на эффективность индукции поствакцинального иммунного ответа
  6. Лекция 10 Антигены. Клеточный иммунный ответ.
  7. Оценка влияния вакцины на параметры гуморального и клеточного иммунитета у здоровых добровольцев
  8. Оценка безопасности и переносимости половинной дозы вакцины у здоровых добровольцев (второй этап исследования)
  9. Оценка безопасности и переносимости полной дозы вакцины у здоровых добровольцев (второй этап исследования)
  10. Оценка безопасности и переносимости отдельных компонентов вакцины у здоровых добровольцев (первый этап исследования)
  11. Лекция 11 Гуморальный иммунный ответ. Иммуноглобулины.
  12. Иммунный ответ. Классспецифические реакции иммунитета.
  13. 1.1.4 Характеристика иммунного ответа на вирус Эбола
  14. Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Пациенты и здоровые добровольцы