Методы исследования

Общеклиническое обследование больного включало в себя клиническую оценку состояния, сбор жалоб, анамнеза, физикальное обследование.

При оценке общеклинического состояния здоровья проводилось измерение антропометрических показателей (рост, вес, определение индекса массы тела, из­мерение окружности талии и бедер с определением показателя ОТ/ОБ), измерение частоты сердечных сокращений и артериального давления.

Измерение АД — измерение проводилось в положении сидя с расположе­нием руки на уровне сердца. Перед измерением АД пациенты отдыхали не менее 5 минут, не употребляли кофеинсодержащие напитки, по меньшей мере, в течение 30 минут, предшествующих измерению АД. Повторное измерение АД проводи­лось через 3-5 минут. Если различие диастолического АД при этих двух измере­ниях было не менее 5 мм рт.ст. — производилось третье измерение АД и вычис­лялась средняя величина между тремя измерениями. При различии диастоличе­ского АД при первых двух измерениях более 5 мм рт. ст., то измерения проводи­лись не менее чем через 15-минутный отдых пациента.

Всем пациентам проводились лабораторные исследования, включающие в себя клинический анализ крови (лейкоциты, эритроциты, гемоглобин, тромбоци­ты, СОЭ, палочкоядерные и сегментоядерные нейтрофилы, лимфоциты, моноци­ты, эозинофилы, базофилы), биохимический анализа крови (мочевина, креатинин, глюкоза, общий белок, билирубин общий, АСТ, АЛТ, КФК, холестерин, тригли­цериды, ЛПВП).

Оценка структурно-функционального состояния почек включала в себя общий анализ мочи, анализ мочи по Нечипоренко, анализ мочи по Зимницкому, определение экскреции натрия с мочой (прибор Architect i2000∕c8000, метод ион- селективный).

Определение скорости клубочковой фильтрации по формуле MDRD про­водилось с помощью электронного калькулятора (http://atio- irk.ru/viewdownload/5/3.html).

Наличие микроальбуминурии определялось с помощью количественной оценки, мы использовали прибор Architect i2000/c8000, метод иммунотурбиди- метрический, Albumin in Urine/CSF FS* (Microalbumin)

Принцип определения заключался в определение концентрации альбумина по конечной точке путём фотометрического измерения реакции антиген-антитело между антителами против человеческого альбумина и присутствующим в образце альбумином, с использованием реагентов (таблица 2.2).

Таблица 2.2 — Реагенты, используемые для определения альбумина в моче

Определение концентрации альбумина было возможно в пределах 3-350 мг/л.

Для калибровки при тестировании мочи использовали набор калибраторов DiaSys TruCal Albumin U/CSF. Значения калибраторов определялись по эталон­ному препарату IFCC/BCR/CAP для 14 белков плазмы CRM 470. Для внутреннего контроля качества при тестировании мочи с каждой серией образцов проводилось измерение контрольной сыворотки DiaSys TruLab Albumin U/CSF.

Сравнение реагента Albumin in Urine∕CSF FS DiaSys (y) и нефелометриче­ских тестов (x) с использованием 123 образцов дало следующие результаты:

y = 1,01x - 0,30 мг/л; r = 0,998.

Сравнение реагента Albumin in Urine/CSF FS DiaSys (y) и иммунотурбиди- метрических тестов (x) с использованием 139 образцов дало следующие резуль­таты:

y = 1,23x + 0,61 мг/л; r = 0,994.

Исследование уровня альдостерона, активности плазматического ренина было проведено 52 пациентам. Исследование проводилось на базе ООО Лабора­тория «Литех», с соблюдением требований, предъявляемых к забору крови и дос­тавке образцов. Нормальными значениями при определении уровня альдостерона считалось в любом положении 40-310 пг/мл, активности плазматического ренина 0,8-5,0 нг/мл/час.

Образцы собирались, с соблюдением следующих условий:

• Поза: пациент находился в положении лежа не менее 1 часа

• Отбор проб проводился в период с 7 утра до 10 утра

• В рационе находилось известное количество натрия

• Лекарственные препараты отменялись за сутки до исследования

• У женщин забор образцов крови осуществлялся в первую фазу менстру­ального цикла.

Все образцы хранились закрытыми при комнатной температуре до 4 часов, так как при 2-8 °C возможна криоактивация из проренина, что может привести к ложноположительному результату значения активного ренина.

Тест «Рениновая активность» (ренин+ангиотензин 1) выполнялся на уста­новке для радиоиммунологических исследований «АРИАН», Витако, РФ. Реакти­вы фирмы Immunotech, A Beckman Coulter Company, США.

Метод радиометрический, прибор гамма счетчик, набор производства Becman Coulter.

Радиоиммунологическое определение ангиотензина I для оценки активно­сти плазматического ренина (АПР) in vitro в плазме было основано на измерении количества образовавшегося продукта ферментативной реакции — ангиотензин I. Образование ангиотензина I в образцах плазмы крови, являющееся результатом ферментативного расщепления субстрата ренина — ангиотензиногена, проводил­ся в присутствии ингибитора, блокирующего превращение ангиотензиногена I в ангиотензиноген II.

Для проведения данного анализа кровь собиралась в охлажденные пробир­ки с ЭДТА, затем отделялась плазма путем центрифугирования при 2-8 С, образ­цы плазмы разделялись на аликвоты и замораживались при температуре